Birincil ve İkincil Hücre Kültürü Arasındaki Fark | Birincil ve İkincil Hücre Kültürü
Birincil ve İkincil Hücre Kültürü
Birincil ve İkincil Hücre Kültürü arasındaki farkı tartışmadan önce, önce hücre kültürünün kısaca tanımlanmasına izin verelim. Hücre kültürü, bir hayvandan veya bitkiden hücreleri çıkarma ve yapay olarak kontrol edilen bir çevrede büyümektir. Hücreler doğrudan dokudan çıkarılabilir ve enzimatik veya mekanik yöntemlerle parçalanabilir veya önceden kurulmuş bir kültürden türetilebilir. Birincil ve ikincil hücre kültürü arasındaki temel fark, birincil hücre kültürü için hücrelerin bir hayvandan veya bitki dokusundan doğrudan elde edildiği iken ikincil hücre kültürü için hücreler önceden kurulmuş birincil kültürden elde edildiğidir. Bu nedenle, ikincil kültür, birincil kültürden kaynaklanan yeni bir kültür.
Birincil ve ikincil hücre kültürünün anlamını daha iyi ayırt etmek için bunlara daha fazla göz atalım.
Birincil Hücre Kültürü Nedir?
Primer hücre kültürü, enzimatik veya mekanik önlemler yoluyla bir ebeveyn hayvan veya bitki dokusundan hücrelerin çıkarılması ve kontrollü çevresel koşullar altında cam veya plastik kaplarda uygun bir substrat içinde hücrelerin büyümesini sürdürmektir. Birincil kültürdeki hücreler, orijinal dokudaki hücrelerle aynı karyotipi (bir ökaryotik hücrenin çekirdeğinde sayı ve kromozom görünümü) taşır. Primer hücre kültürü, kültürde kullanılan hücre türüne göre ikiye ayrılabilir.
- Ankraj Bağımlı veya Yapışık Hücre - Bu hücreler büyüme için bir ek gerektirir. Yapışık hücreler genellikle organların dokularından, örneğin hücrelerin hareketsiz olduğu ve bağ dokusunda gömülü bulunduğu böbrekten türetilir.
- Anchorage Bağımsız veya Süspansiyon Hücreleri - Bu hücrelerin büyüme için bir eklenti gerektirmez. Başka bir deyişle, bu hücreler kültür teknesinin yüzeyine yapışmazlar. Tüm süspansiyon kültürleri kan sisteminin hücrelerinden türetilmiştir; Örneğin, beyaz kan hücresi lenfositleri plazmada asılır.
Birincil kültürlerden türetilen hücrelerin yaşam ömrü sınırlıdır. Hücreler çeşitli nedenlerden ötürü süresiz olarak tutulamazlar. Birincil kültürde artan hücre sayıları, substratın ve besinlerin tükenmesine yol açacaktır.Ayrıca, hücresel aktivite, hücre büyümesini engelleyerek kültürdeki toksik metabolitlerin seviyesini kademeli olarak artıracaktır.
Bu aşamada, sürekli hücre büyümesini sağlamak için bir ikincil veya bir altkültür gerçekleştirilmelidir.
İkincil Hücre Kültürü Nedir?
Yukarıda tarif edildiği gibi yapışkan kültürlerdeki hücreler mevcut tüm substratı kaplarlar veya süspansiyon kültürlerindeki hücreler büyümeyi desteklemek için ortamın kapasitesini aştığında hücre çoğalması azalmaya veya tamamen durmaya başlar. Devamlı büyüme için optimal hücre yoğunluğunu korumak ve daha fazla çoğalmayı teşvik etmek için, birincil kültür alt kültürel olmalıdır. Bu işlem sekonder hücre kültürü olarak bilinir.
İkincil hücre kültürü sırasında, primer kültürdeki hücreler, taze büyüme ortamı ile yeni bir tekneye aktarılır. Süreç, önceki büyüme ortamının uzaklaştırılmasını ve yapışık temel kültürlerde yapışmış hücrelerin ayrışmasını içerir. İkincil hücre kültürü periyodik olarak büyüyen alana ve taze besleyicilere sahip hücreleri sağlamak için gereklidir, böylece hücrelerin ömrünü uzatır ve kültürdeki bir dizi hücre genişletilir.
Birincil bir kültürün belirli bir hacimde taze büyüme ortamına sekonder kültürlenmesi, hücre hatlarının uzun süreli bakımına izin verir. Daha geniş bir hacimdeki taze büyüme ortamı içine ikinci kültür, örneğin endüstriyel işlemler veya bilimsel deneylerde, hücre sayısını arttırmak için uygulanmaktadır.
Primer Hücre Kültürü ve İkincil Hücre Kültürü Arasındaki Fark Nedir?
Şimdi iki terimi ayrı olarak anladığımız için, ikisini aralarında bulunan diğer farklılıkları bulmak için kıyaslayacağız.
Birincil ve / veya İkincil Hücre Kültürü Ne Zaman Kullanılır
Bu, öğrenmek istediğiniz şey ve gerçekleştirdiğiniz deney türüne bağlıdır.
Primer Hücre Kültürü: Bu, ilgilenilen ebeveyn dokusundan hücrelerin kültülmesi için kullanılacak süreçtir. Birincil kültürdeki hücreler, substrat ve besin maddelerinin bitkinliğinden ve nüfus artışı ile toksinlerin birikiminden ötürü sınırlı bir ömre sahip olacaklardır. İzolasyon işleminde kullanılan ayırma tekniklerine rağmen, birincil kültür, birkaç hücre türü içerebilir. Bununla birlikte, bu, her türden deneyde bir problem olmayabilir ve bu gibi durumlarda tek başına birincil kültür kullanılabilir.
İkincil Hücre Kültürü: Genellikle primer kültürden elde edilen hücre sayısı deneylerde yetersizdir. İkincil hücre kültürü, hücre popülasyonunu genişletme ve ömrü uzatma fırsatı verir. Seçici bir ortam kullanarak hücrelerin daha fazla seçilmesini sağlar ve popülasyonda genotipik ve fenotipik tekdüzelik sağlar. Bu süreç, temel karakterizasyon, koruma ve deney için çoğaltılmış kültürler üretmek için kullanılır.
Ebeveyn Dokusuna Benzerlik
Primer Hücre Kültürü: Primer hücre kültürü için hücreler doğrudan bir hayvan veya bitki dokusundan elde edilir. Bu nedenle, primer kültürdeki hücreler, ebeveyn dokularına çok yakındır ve biyolojik yanıt, bir ikincil hücre kültürüne kıyasla bir in vivo duruma daha yakın olabilir.
İkincil Hücre Kültürü: İkincil hücre kültürü birincil hücre kültüründen kaynaklanır. Alt kültürleme, hücrelerin ömrünü uzatmasına rağmen, birkaç aşamadan sonra hücrelerin değişime uğraması ya da belirli bir süreden daha fazla bölünmeme kontrolünü kaybetme ihtimali vardır. Bunun nedeni, alt kültürleme sırasında primer hücrelerdeki mutasyonlar veya genetik değişiklikler olabilir. Örneğin, bazı mikroorganizmalar biyolojilerini değiştirerek doğal çevrelerinden çoğunlukla farklı olan kültür koşullarına uyum sağlama eğilimindedirler.
Kültür Üretme Süreci - Hücrelerin Elde Edilmesi
Birincil Hücre Kültürü: Birincil hücre kültüründe, hayvan veya bitki dokusu durulama, diseksiyon ve mekanik veya enzimatik parçalanma evrelerinden geçecektir. Ayrılmış doku çeşitli hücre tipleri içerecektir ve bu, ilgili hücrelerin izole edilmesi için bir ayırma tekniğinin uygulanmasını gerektirebilir.
İkincil Hücre Kültürü: İkincil hücre kültüründe, birincil kültür yapışkan bir kültürse, ilk adım mekanik veya enzimatik yöntemlerle hücrelerin ataşmanından (kültür kabının yüzeyi) ayrılmasıdır. Daha sonra, hücrelerin tek bir hücre süspansiyonu oluşturmak için birbirlerinden ayrılması gerekir.
Kültür İçindeki Hücre Sayısı
Birincil Hücre Kültürü: Birçok primer hücre küçük kümelerde daha iyi hayatta kalması nedeniyle mutlak tekli hücre süspansiyonu olması istenmemektedir.
İkincil Hücre Kültürü: Tek bir hücre süspansiyonu oluşturmak yeterlidir.
Kültür Ömrü
Birincil Hücre Kültürü: Primer hücre kültürlerinin sınırlı ömürleri vardır. Yukarıda açıklandığı gibi, hücrelerin büyümesinin substrat ve besin maddelerini tüketmesi ve toksik metabolitlerin birikmesine neden olmasıdır. Sonuç olarak, yavaş yavaş hücrelerin büyüme oranı düşer ve hücrelerin ölümüne neden olur.
İkincil Hücre Kültürü: İkincil hücre kültürü, hücrelerin ömrünü uzatır. Periyodik alt kültür, birincil hücrelerin dönüşümü veya genetik değişikliği yoluyla ölümsüz hücreler üretebilir.
Kontaminasyon riski
Birincil Hücre Kültürü: Birincil hücre kültürlerine dikkat etmek daha zordur. Genel olarak, birincil hücre kültürleri, amino asitler, mikro besinler, bazı hormonlar ve büyüme faktörleri içeren zengin bir karışıma ihtiyaç duyarlar. Sonuç olarak, primer hücre kültürlerinde kontaminasyon riski ikincil hücre kültürlerinden daha yüksektir.
İkincil Hücre Kültürü: İkincil hücre kültürlerinin bakımı oldukça kolaydır ve kontaminasyon riski primer hücre kültürlerinden daha düşüktür.
Bu yazıda, birincil hücre kültürü ve ikincil hücre kültürü terimlerini anlama ve bunları arasındaki temel farklılıkları vurgulamaya çalıştık. Temel fark, hücrelerin kültürden nasıl türetildiği konusundadır; Birincil hücre kültürü için hücreler doğrudan bir hayvan veya bitki dokusundan elde edilirken ikincil hücre kültürü için hücreler önceden kurulmuş birincil kültürden elde edilir.
Kaynaklar: Hücre Kültürü Temelleri - Invitrogen ve Gibco'nun Bir El Kitabı Freshney, R.I. (2006). Hücre Kültürünün Temel Prensipleri. Onkoloji ve Uygulamalı Farmakoloji Merkezi. Görüntü Nezami: Flickr aracılığıyla Umberto Salvagnin'in (CC BY 2.0) "Hücre Kültürü"
