RT-PCR ve QPCR Arasındaki Fark
Ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu uygulanırken DNA ve RNA'yı niceleştirirken geleneksel tek yönlü yaklaşım yöntemini değiştirdi. (RT-PCR)
RT-PCR ve QPCR
Biyoteknolojideki ilerlemeler, yıllar boyunca organ nakillerine yönelik taleplerle başa çıkmanın birkaç yolunu bulmuştur. Daha önce, herhangi bir organı ölümünden hemen sonra ihtiyaç sahibi bir hastaya gönüllü olarak bağışlayacak bir kişi sadece nakil operasyonuna atlayabilir. Biyologların sürekli çalışmaları ve araştırmaları kök hücrelerin keşfine yol açıyor.
Kök hücreler, bir embriyonun DNA'sından alınan hücrelere atıfta bulunur ve temelde DNA'nın alındığı organın bir klonu olacak hücrelerin yenilenmesi için kaynak sağlayacaktır. İnsan hakları savunucuları bu tür işlemlerin durdurulması için lobi çalışırken, başarılı operasyonlar organ nakillerinde kök hücre gelişiminin etkililiğini kanıtlamıştır.
Ancak, kök hücreleri takdir edip tam olarak anlamadan önce, bu bilimsel keşifle bağlantılı farklı terminolojilere aşina olmaya ihtiyaç vardır. Kök Hücre yetiştiriciliği, DNA ve kodlaması ile ilgilidir. Bu nedenle, öğrenciler veya bu alanda çalışan herhangi bir kişi RT-PCR ve qPCR arasında ayrım yapmak için hayati önem taşımaktadır.
Ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR), polimeraz zincir reaksiyonunun veya PCR'ın birçok varyantından biridir. Bu laboratuar tekniği moleküler biyolojide yaygın olarak kullanılmaktadır, zira bilim adamları "amplifikasyon" olarak adlandırılan bir süreçle belli bir DNA dizisinin birden fazla kopyasını üretmektedir. "RT-PCR ve geleneksel PCR arasındaki fark, RNA'nın ters transkriptaz kullanan DNA tamamlayıcısı içine ters olarak önce transkribe edilmesidir. Ters çevrilen kopyalamayı içeren yeni tamamlayıcı DNA daha sonra geleneksel PCR veya gerçek zamanlı PCR kullanılarak amplifiye edilir.
Bu işlemi inceleyen çoğu öğrenci, ters transkripsiyon PCR'ini ve gerçek zamanlı PCR'ı değiştirme hatası yaparken, ikisi de benzer şekilde kısaltılır. Karışıklığı önlemek için, biyologlar gerçek zamanlı PCR'ı nicel gerçek zamanlı PCR veya qPCR olarak etiketliyorlar.
QPCR, RT-PCR'den büyük ölçüde farklıdır, zira qPCR amplifikasyonu oluştuğunda ölçmekten sorumludur. RT-PCR'nin amplifikasyon sürecini başlattığı söylenebilir; qPCR, prosedür gerçekleştikçe onu ölçer.
Kantitatif Gerçek Zamanlı PCR
QPCR, DNA ve RNA'yı niceleştirirken geleneksel tek yönlü yaklaşım yöntemini gerçekten devrim yaptı, çünkü qPCR yönteminin uygulanması, biyolojistlerin çekirdek asitinin başlangıç konsantrasyonunu belirlemesini mümkün kıldığı için Reaksiyonun sonuçları gözlemlenip indirilmeden önce bile.
Şimdi, genetik çalışmalar için en güçlü ve hassas analiz tekniği olarak kabul edilen qPCR uygulaması önemli ölçüde genişledi.Şu anda nicel gen ekspresyon analizi, genotipleme, patojen bulma ve SNP analizine RNA girişim ölçümleri ile katılıyor.
QPCR, gözlenen ve deneylenen dokuların hücrelerinde bulunan haberci RNA ve MikroRNA'yı nicelleştirmek için genellikle ters transkripsiyon işlemi ile birleştirilir. Bu daha sonra iki arasında görünür bir fark daha verir: RT-PCR amplifikasyon işlemi için kullanılabilir, ancak niceleme amaçları için qPCR ile kaynaştırılması gerekir.
QPCR'nin, PCR ilerlemesinin üstel büyüme (log) fazı olarak toplanabileceğinden, daha niceliksel olduğu da bilinir. Biyologlar, PCR yan ürününün miktarının, qPCR ile ölçülecek olan şablon nükleik asit miktarı ile doğru orantılı olduğunu not ettiler.
Öte yandan, bir konsantrasyonun belirlenmiş standardını takiben, bir jel üzerindeki amplifiye bandın yoğunluğunun gözlemlenmesi "yarı kantitatif" çıkarsamaya neden olabileceğinden, RT-PCR'in nicel bir niteliği olmaktan çok uzaktır.
Özet:
1. QPCR ve RT-PCR her ikisi de biyoteknolojide kullanılan ve DNA'nın çoklu kopyalarının üretimi için kullanılan terimlerdir.
2. RT-PCR, DNA kodunun ters transkripsiyonunu yükseltmek için kullanılır; QPCR amplifikasyonu ölçer.
3. RT-PCR, amplifikasyon için, qPCR ise nicelikleme içindir.
4. QPCR doğasında niceliksel iken RT-PCR değildir.
